یافتن آنتی بیوتیك های مناسب برای انواع باکتری های بدن، جلسه دوم
هدف: در این پروژه می خواهیم بدانیم باکتری های بدن مان به چه آنتی بیوتیک هایی حساس و به کدام ها مقاوم است، تا درصورت لزوم بتوانیم با آنها مقابله کنیم.
حداقل زمان مورد نیاز برای انجام پروژه: 6 هفته
هزینه برآوردی: متوسط
سطح دشواری: متوسط
مواد و وسایل مورد نیاز
• برای ساخت محیط:
- پودر محیط کشت مولرهینتون آگار 4/5 گرم (یا نوترینت آگار2/4 گرم)
- آب مقطر 150 سی سی
- استوانه مدرج
- ارلن 250 سی سی
- پلیت 10 سانتی متری پلاستیکی 5 عدد
- پنبه
- شعله
- ترازو با دقت دهم گرم
- اتوکلاو
• برای نمونه گیری:
- سواب
- انسان!
• برای کشت و روش آنتی بیوگرام
- سواب
- لوله آزمایش یک عدد
- پنبه
- لوپ
- انکوباتور
- سرم فیزیولوژی 4 سی‌سی
- دیسک های آنتی بیوتیک شامل تتراسایکلین، کلرامفنیکل، آمپی‌سیلین، تری متوپریم، استرپتومایسین و نالیدیکسیک اسید
- خط‌کش
• برای رنگ‌آمیزی:
- لام و مداد الماس (یا ماژیک CD)
- سِت رنگ آمیزی گرم (شامل: کریستال ویوله، لوگل، رنگبر و
سافرانین)
- میکروسکوپ و روغن ایمرسیون
روش انجام پروژه
مرحله اول: ساخت محیط کشت جامد
برای انجام آنتی بیوگرام هم می توان از نوترینت آگار استفاده کرد و هم می توان از مولر هینتون آگار.
انجام روش آنتی بیوگرام در مورد هر نمونه باكتری ای که دارید حداقل به 5 پلیت نیاز دارد. برای ساخت 5 پلیت مولر هینتون آگار 4/5 گرم از پودر آن را وزن کرده و در 150 سی‌سی آب مقطر حل می کنید. محلول را حرارت دهید تا شفاف شود سپس با اتوکلاو استریل کنید و در کنار شعله درون پلیت ها بریزید.
(شرح ساخت محیط کشت با جزئیات کامل در پروژه «یافتن تنوع اكولوژیكی میكروب‌ها» آمده است)
مرحله دوم: نمونه گرفتن از خودتان و کشت باکتری خالص
حدود 100 تریلیون باکتری در بدن شما در حال زندگی است! کافی است سوابی استریل بردارید و از دندان، گلو، بینی، پوست و یا حتی از مدفوع خودتان نمونه بگیرید و در محیط جامد کشت دهید؛ مشابه كاری كه كارشناسان آزمایشگاه تشخیص طبی برای تشخیص امراض مختلف عفونی انجام می‌دهند.
این کار را باید به طریقی انجام دهید که کلنی تک بر روی محیط رشد کند. برای این‌كار از روش كشت چهار مرحله ای استفاده كنید.
پس از رشد، کلنی تک را با لوپ استریل برداشته و روی محیطی دیگر کشت دهید. بدین ترتیب ما باکتری خالص خواهید داشت.
در هر مرحله از کار، پلیت‌ها را پشت‌نویسی كنید بدین صورت که اطلاعات مربوطه شامل نام خودتان، نوع نمونه کشت داده شده و تاریخ انجام آزمایش را بر کف پلیت در کناره ها یادداشت کنید.
کشت چهار مرحله‌ای (کشت خطی)
کاربرد: خالص کردن باکتری و گرفتن کلنی تک
ابزار کشت: لوپ
توجه: تمام مراحل کشت کنار شعله انجام شود.
ابتدا لوپ خود را با حرارت دادن روی شعله استریل کرده و کنار شعله نگه دارید تا خنک شود؛
از مخلوط میکروبی موجود، مقداری باکتری با لوپ بر می دارید؛
بر روی محیط کشت آگاردار (جامد) خطوطی زیگزاگی در سطح محیط بكشید (مرحله یک)
لوپ را استریل كنید؛
خطی از روی مرحله قبلی بكشید سپس بدون این که خطوط مرحله یک و دو با هم تداخل داشته باشند زیگزاگ هایی با فاصله بیشتر، در دوم بكشید (مرحله دو)؛
لوپ را استریل كنید؛
خطی از روی مرحله دو بكشید و بازهم زیگزاگ هایی با فاصله بیشتر در سوم بكشید (مرحله سه)؛
برای کشیدن مرحله چهارم لازم نیست لوپ را استریل کنید، این بار در فضاهای باقی مانده از محیط خطی مارپیچ بكشید.
بعد از این مراحل لوپ را روی شعله استریل کرده و سر جای خود بگذارید و محیط را نیز وارونه کرده و برای رشد در انکوباتور قرار دهید.
جعبه ابزار زیستی
فیلدوپلاتین (لوپ (Inculation loop ))
فیلدوپلاتین وسیله‌ای است برای انتقال میکروب ها از یک محیط کشت به محیط کشتی دیگر و یا بر روی سطح یک لام برای بررسی میکروسکوپیک.
همان طور‌که در شکل مشاهده می‌شود این وسیله دارای یک دسته عایق است که به آن مفتولی از جنس پلاتین وصل شده است. اگر مفتول صاف باشد به آن فیلدوپلاتین سوزنی می‌گویند و اگر سری گرد داشته باشد لوپ نامیده می‌شود. لوپ یکی از مهم‌ترین وسایل مورد نیاز در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی است.
نحوه استفاده از لوپ:
برای اینکه با لوپ، تنها باکتری مورد نظر خود را بردارید نیاز دارید که قبل و البته بعد از استفاده، آن را استریل کنید. به این ترتیب که لوپ را روی شعله می‌گیرید تا حلقه آن سرخ شود، با این عمل تمام باكتری های قسمت حرارت دیده از بین می رود. سپس آن را 10 تا 15 ثانیه در چند سانتی متری اطراف شعله نگه دارید تا کمی خنک شود. حالا می توانید با این لوپ از محیط کشت، باکتری بردارید.
توجه توجه!! اگر لوپ را در حالی که هنوز داغ است وارد محیط کشت کنید باعث ذوب قسمتی از محیط كشت شده و ذرات کوچک واجد میکروارگانیسم در هوا پراکنده و خدای نكرده وارد چشم یا دهان تان می شود!
اگر لوپ نداشتیم چه کار کنیم؟
با تكه ای كوچك از سیم، خودمان می سازیم.
مطالب مرتبط:
یافتن آنتی بیوتیك های مناسب برای انواع باکتری های بدن، جلسه اول
یافتن آنتی بیوتیك های مناسب برای انواع باکتری های بدن، جلسه دوم
یافتن آنتی بیوتیك های مناسب برای انواع باکتری های بدن، جلسه سوم
یافتن آنتی بیوتیك های مناسب برای انواع باکتری های بدن، جلسه چهارم
یافتن آنتی بیوتیك های مناسب برای انواع باکتری های بدن، جلسه پنجم
یافتن آنتی بیوتیك های مناسب برای انواع باکتری های بدن، جلسه ششم
یافتن آنتی بیوتیك های مناسب برای انواع باکتری های بدن، جلسه هفتم
یافتن آنتی بیوتیك های مناسب برای انواع باکتری های بدن، جلسه هشتم
یافتن آنتی بیوتیك های مناسب برای انواع باکتری های بدن، جلسه نهم
یافتن آنتی بیوتیك های مناسب برای انواع باکتری های بدن، جلسه دهم
بخش پژوهش های دانش آموزی تبیان، تهیه: مهبان رحیمی فرد
تنظیم: زینب شاه مرادی
