سه شنبه 3 اسفند 1395 - 24 جمادي الاول 1438 - 21 فوريه 2017
برای بررسی اثر ضد میکروبی آنتی بیوتیکها انجام تست آنتی بیوگرام لازم است که در این جلسه با یادگیری اصول آن ، برا ی مشاهده اثر اکتینومیست ها از آن استفاده می کنیم...
عکس نویسنده
عکس نویسنده
نویسنده : زینب باقری
بازدید :
زمان تقریبی مطالعه :

جداسازی باکتری های تولید کننده آنتی بیوتیک از خاک_ جلسه پنجم

 

انجام تست آنتی بیوگرام با اکتینومیست ها


1- اهداف جلسه
برای بررسی اثر ضد میکروبی آنتی بیوتیک ها انجام تست آنتی بیوگرام لازم است که در این جلسه با یادگیری اصول آن، برای مشاهده  اثر اکتینومیست ها از آن استفاده می کنیم.

 

2- وسایل مورد نیاز
محیط کشت، سواب استریل، لوپ


    هزینه : کم

 

اصطلاح آنتی بیوز ظاهرا اولین بار در سال 1889 برای توضیح وجود رقابت در بین میکروارگانیسم ها استفاده شد، که در آن قوی ترین زنده می ماند. ناسازگاری میان میکروب های مختلف سال هاست که شناخته شده است و در کشت خاک و یا هوا بین باکتری ها ناسازگاری پیدا می شود و بین کلنی آنها هاله ای به وجود می آید. بعد از آن تحقیقات نشان داد که این فراورده های میکروبی بازدارنده رشد را می توان در درمان بیماری ها استفاده کرد.


آنتی بیوتیک ها فراورده های حاصل از فعالیت میکروب ها است که به طور اختصاصی رشد دسته ای دیگر از میکروب ها را متوقف ساخته یا آنها را می کشد. به دنبال کشف پنی سیلین، آنتی بیوتیک های بسیاری شناسایی شده اند.
تست آنتی بیوگرام شامل سنجش میزان توانایی یک آنتی بیوتیک و یا سایر عوامل ضد میکروبی برای ممانعت از رشد باکتری ها در آزمایشگاه می باشد. در واقع این تست به ما نشان می دهد که عامل ضد میکروبی بر روی میکروب ما موثر است  و یا نه.
در این جلسه با استفاده از این روش می توانیم خاصیت ضد میکروبی اکتینومیست ها را مشاهده کنیم.


روش کار:

برای شروع ما ابتدا به یک کشت چمنی خالص از اکتینومیست ها و از یک باکتری دیگر نیاز داریم تا اثر اکتینومیست را بر روی آن بررسی کنیم. این باکتری دوم می تواند باکتری از پوست، دهان و یا آنچه مورد نظر شماست تهیه شود.
قبل از شروع به روش آنتی بیوگرام باید ابتدا با کاغذ صافی دیسک هایی بسازیم و آنها را به اکتینومیست ها آغشته کنیم.. بدین صورت که  کاغذ صافی را با پانچ سوراخ سوراخ می کنیم و بعد دایره های درآمده از پشت پانچ را به عنوان پایه دیسک استفاده می کنیم.


بعد از اینکه کاغذ ها را در اتوکلاو  استربل کردید با قرار دادن بر روی محیط کشت خالص اکتینومیست ها، به باکتری آغشته می کنید. به این ترتیب دیسک هایی آغشته به اکتینومیست خواهیم داشت.


برای انجام کشت چمنی از وسیله ای به نام سواب استفاده می کنیم. نکته مهم در اینجا این است که نمی توان از سوسپانسیون میکروبی (تعداد باکتری تلقیح شده در آب مقطر استریل) با غلظت دلخواه برای انجام تست آنتی بیوگرام استفاده کرد. از این رو برای استاندارد کردن غلظت سوسپانسیون از استانداردی به نام مک فارلند استفاده می شود. روش ساده برای شبیه سازی غلظت  0/5 مک فارلند، کدورت 2 گرم نمک در 4 سی سی آب مقطر است.

جداسازی باکتری های تولید کننده آنتی بیوتیک از خاک، جلسه پنجم

لوله آزمایشی استریل برداشته و در آن حدود 4 سی سی سرم فیزیولوژی می ریزیم سپس کمی از باکتری مورد نظر که خالص شده است را به کمک سواب در آن حل می کنیم به اندازه ای که کدورت محلول باکتری مثل کدورت 2 گرم نمک در 4 سی سی آب مقطر شود. سواب را از محلول باکتری در آورده و بر تمام سطح پلیت می کشیم (کشت چمنی می دهیم) طوری که جایی از سطح محیط نمانده باشد که آغشته به باکتری نباشد. 5 دقیقه صبر می کنیم تا محلول باکتری جذب محیط شود.


سپس پنسی را برداشته روی شعله می گیریم تا استریل شود و به کمک آن دیسک های آغشته به اکتینومیست را با فاصله بر روی محیط قرار می دهیم. بهتر است در هر محیط از 3 دیسک استفاده شود به طوری که حداکثر فاصله را با یکدیگر و با دیواره پلیت داشته باشند تا هاله ها به طور کامل قابل مشاهده باشند. بعد از قرار دادن دیسک ها کمی آنها را باپنس فشار می دهیم تا هنگام برگرداندن پلیت از سطح محیط کنده نشوند.


بعد از انکوباسیون محیط در دمای 37 درجه برای 48 تا 72 ساعت می توانید هاله عدم رشد را در روی محیط بررسی کنید.


اگر هدف تنها مشاهده خاصیت ضدمیکروبی اکتینومیست باشد میتوان ، دیسک های تهیه شده را بر روی محیط کشت مخلوط و خالص نشده نیز قرار داد.
برای اندازه گیری از خط کش معمولی استفاده کنید، همیشه امتداد خط کش باید از وسط دیسک عبور کند. توجه کنید که همیشه قطر اندازه گیری می شود.
قطر هاله به قدرت نفوذ و میکروب کشی ماده تولید شده توسط اکتینومیست مورد آزمایش بستگی دارد.
هر اندازه قطر هاله ایجاد شده بیشتر باشد نشان دهنده این است که ماده ضدمیکروبی آزاد شده توسط اکتینومیست ها اثر بیشتری بر باکتری مورد مطالعه دارد.


ماده ضد میکروبی را با روش های بیوشیمیایی می توان از باکتری تخلیص کرد.
در پایان این جلسات شما توانسته اید وجود حسایست و یا عدم وجود آن را بر روی باکتری های دیگر بررسی کنید و به این صورت تولید مواد ضدمیکروبی توسط اکتینومیست ها را شناسایی کنید.
می توانید هاله عدم رشد را بر روی محیط باکتری های مختلف آزمایش کرده و حساسیت آنها به مواد ضد میکروبی اکتینومیست ها را باهم مقایسه کنید.

جداسازی باکتری های تولید کننده آنتی بیوتیک از خاک_ جلسه اول

جداسازی باکتری های تولید کننده آنتی بیوتیک از خاک_ جلسه دوم

جداسازی باکتری های تولید کننده آنتی بیوتیک از خاک_ جلسه سوم

جداسازی باکتری های تولید کننده آنتی بیوتیک از خاک_ جلسه چهارم

جداسازی باکتری های تولید کننده آنتی بیوتیک از خاک_ جلسه پنجم


بخش پژوهش های دانش آموزی تبیان
تهیه: حمیده طایفی
تنظیم : علی سرمدی
 

تلفن : 81200000
پست الکترونیک : public@tebyan.com
آدرس : بلوارکشاورز ، خیابان نادری ، نبش حجت دوست ، پلاک 12

ارتباط با ما

روابط عمومی

درباره ما

نقشه سایت

تعدادبازدیدکنندگان
افراد آنلاین