سه شنبه 3 اسفند 1395 - 24 جمادي الاول 1438 - 21 فوريه 2017
بعد از آشنایی با روش کشت، در این جلسه از اکتینومیست ها یک کشت خالص برای مرحله بعدی آزمایش ها، تهیه می کنیم...
عکس نویسنده
عکس نویسنده
نویسنده : زینب باقری
بازدید :
زمان تقریبی مطالعه :

جداسازی باکتری های تولید کننده آنتی بیوتیک از خاک_ جلسه چهارم

جدا و خالص سازی اکتینومیست ها و کشت مجدد

 

 اهداف جلسه
بعد از آشنایی با روش کشت، در این جلسه از اکتینومیست ها یک کشت خالص برای مرحله بعدی آزمایش ها، تهیه می کنیم.

 

وسایل مورد نیاز

 

  • پلیت محیط کشت جامد استریل
  •  لوپ
  • شعله

 

    هزینه : کم

 

کشت در پلیت با روش های مختلفی قابل انجام است. برای دستیابی به کلنی خالص از باکتری از روش کشت خطی استفاده می شود.


- کشت خطی
در کشت خطی یا چهار مرحله ای با سوزاندن لوپ در انتهای هر مرحله، از تراکم باکتری ها کاسته و به این صورت می توانیم در پایان کلنی تک داشته باشیم. کلنی تک یا خالص تنها از یک نوع باکتری به وجود آمده است.
در این روش ابتدا به وسیله یک لوپ استریل ( با سوراندن لوپ در شعله) مقداری از کلنی های  باکتری را برداشته و آن را روی سطح محیط کشت جامد به صورت خط های موازی و در چند جهت می کشید.

در کشت های خطی برای به دست آوردن کلنی های تک می توانید پلیت را به 4 قسمت تقسیم کنید، بعد در قسمت اول ابتدا نوک لوپ را که محتوی باکتری است را به صورت خط های موازی کشیده و بعد از سوزاندن لوپ خطوط را در منطقه دوم از انتهای خط انتهایی منطقه اول در جهت دیگر ادامه دهید و در منطقه سوم و چهارم هم به همین صورت عمل کنید. 
 

خصوصیت این روش این است که وقتی خطوط موازی را روی سطح محیط می کشید به ترتیب از تراکم باکتری ها کاسته می شود و به انتهای خط که می رسید تراکم باکتری کمتر است و در منطقه دیگر وقتی از انتهای خط منطقه قبلی استفاده می کنید در واقع تراکم بسیار کمتر از تراکم باکتری ها در ابتدا می باشد و در نتیجه در مناطق دیگر هم به ترتیب از تعداد باکتری ها کاسته می شود بنابراین انجام درست کشت خطی منجر به ایجاد کلنی خالص می شود.
توجه داشته باشید که کلنی خالص به کلنی گفته می شود که با کلنی دیگر تماس نداشته باشد.

 

جداسازی باکتری های تولید کننده آنتی بیوتیک از خاک، جلسه چهارم


در بین هر مرحله لازم است که لوپ بر روی شعله سوزانده شود تا استریل شود. برای شروع مرحله بعد لازم است که لوپ کمی خنک شود، زیرا حرارت زیاد آن می تواند باعث سوزاندن و مرگ باکتری ها شود.
برای کشت زیاد باکتری خالص و انجام تست آنتی بیوگرام به کشت چمنی از باکتری مورد نظر نیاز است. بعد از خالص سازی میکروب، کلنی تک و خالص حاصل شده را می توان با سواب بر روی محیط به طور کامل کشت داد. سواب به طور کامل و یکدست باکتری را در سطح محیط کشت می دهد.

جداسازی باکتری های تولید کننده آنتی بیوتیک از خاک، جلسه چهارم

روش کار:
محیط کشتی که از خاک تهیه کرده اید حاوی انواع باکتری ها و قارچ هاست. برای خالص سازی اکتینومیست ها از دیگر باکتری هایی که روی محیط رشد کرده اند لازم است که از روی شکل ظاهری کلنی های این گونه از باکتری را شناسایی کنید.
در مرکز و سمت راست تصویر کلنی های مربوط به اکتینومیست ها قابل مشاهده اند. هر کلنی شامل یک میلیارد سلول باکتری است!
با استفاده از لوپی که به وسیله شعله استریل کرده اید ، بخشی از کلنی اکتینومیست را برداشته و بر روی یک محیط کشت استریل دیگر به صورت چهار مرحله ای کشت دهید.
بعد ار انکوباسیون محیط کشت به مدت 5 تا 7 روز در دمای 28 درجه سانتی گراد می توانید کلنی های خالص از اکتینومیست را بر روی محیط کشت مشاهده کنید.


برای ادامه کار در جلسه بعد، به یک کشت خالص و انبوه از اکتینومیست ها نیاز است. برای تهیه این کشت لازم است که از یک کلنی خالص اکتینومیست بر روی یک محیط کشت توسط لوپ استریل، به صورت چمنی کشت تهیه شود. در کشت چمنی تمام سطح محیط کشت با لوپ به باکتری آغشته می شود.
در پایان این جلسه بعد 5 تا 7 روز انکوباسیون محیط کشت در دمای 28 درجه سانتی گراد شما یک پلیت حاوی کشت چمنی خالص از باکتری اکتینومیست در اختیار خواهید داشت.

جداسازی باکتری های تولید کننده آنتی بیوتیک از خاک_ جلسه اول
جداسازی باکتری های تولید کننده آنتی بیوتیک از خاک_ جلسه دوم
جداسازی باکتری های تولید کننده آنتی بیوتیک از خاک_ جلسه سوم
جداسازی باکتری های تولید کننده آنتی بیوتیک از خاک_ جلسه چهارم
جداسازی باکتری های تولید کننده آنتی بیوتیک از خاک_ جلسه پنجم


بخش پژوهش های دانش آموزی تبیان
تهیه: حمیده طایفی
تنظیم : علی سرمدی
 

تلفن : 81200000
پست الکترونیک : public@tebyan.com
آدرس : بلوارکشاورز ، خیابان نادری ، نبش حجت دوست ، پلاک 12

ارتباط با ما

روابط عمومی

درباره ما

نقشه سایت

تعدادبازدیدکنندگان
افراد آنلاین